張 波，邸雅南，彭德銀

北京航天總醫(yī)院消化內(nèi)科，北京 100076

胃癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)生、發(fā)展是一個多因素、多步驟的復(fù)雜過程。隨著人們對腫瘤研究的不斷深入，黏蛋白1（mucin1，MUC1）作為黏蛋白家族中的重要成員之一，在胃癌中的表達和轉(zhuǎn)移中的作用也日益凸顯出來。本文就MUC1在轉(zhuǎn)化的可傳代人胃黏膜上皮細胞系（GES-1）和低分化胃腺癌細胞系（BGC-823）中的表達及其意義進行探討。

1 材料與方法

1.1 細胞培養(yǎng)和細胞株處理

SV40病毒轉(zhuǎn)化的可傳代人胃黏膜上皮細胞系（GES-1）由北京市腫瘤防治研究所提供；低分化胃腺癌細胞系（BGC-823）由哈醫(yī)大腫瘤研究所提供。GES-1和BGC-823用含15%滅活胎牛血清和適量抗生素的RPMI Medium 1640培養(yǎng)液，在含5%CO2、37℃條件下培養(yǎng)。在24孔板中每孔均放置5 mm×5 mm的蓋玻片一塊，并加入對數(shù)期的GES-1、BGC-823 細胞分別為（4×104）、（10×104）個，貼壁生長至占蓋玻片面積的80%時，進行固定、染色。

1.2 試劑

羊抗人MUC1多克隆抗體購自SANTA CRUZ公司；FITC-兔抗山羊IgG購自北京中杉；RPMI Medium 1640購自GIBCO；FBS購自四季青公司。

1.3 間接免疫熒光染色法檢測黏蛋白1在胃黏膜上皮細胞系和低分化胃腺癌細胞系中的表達

棄去24孔板中培養(yǎng)液，滴加pH 7.4的PBS沖洗標(biāo)本，輕微震蕩；4%多聚甲醛室溫固定30 min；0.5%Triton X-100/PBS液抽提30 min；然后用PBS沖洗，取出玻片，滴加1∶200羊抗人MUC1多克隆抗體；將玻片置于濕盒內(nèi)，4℃過夜；用PBS沖洗后取出玻片，滴加1∶100 FITC-兔抗山羊IgG抗體（在暗室中進行）；室溫，將玻片平放在濕盒內(nèi)2 h；然后熒光顯微鏡下觀察拍照。

1.4 結(jié)果判定

設(shè)兩組陰性對照：一組不加Ⅰ抗和Ⅱ抗，用于熒光強度的基線校正；一組僅加Ⅱ抗，用于非特異性結(jié)合對照。用熒光顯微鏡在藍色激發(fā)光下觀察結(jié)果：抗體結(jié)合處呈現(xiàn)綠色熒光，說明該處有MUC1的存在，判定為陽性表達細胞，如無綠色熒光呈現(xiàn)，判定為陰性表達細胞；重復(fù)試驗，取平均值。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

利用多功能成像分析系統(tǒng) （Motic軟件開發(fā)公司）進行MUC1的平均光密度檢測。采用SPSS 13.0軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，組間比較采用t檢驗，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

MUC1在GES-1中的表達均為弱陽性；而在BGC-823中MUC1的表達為強陽性，由表1可見，GES-1和BGC-823細胞系中MUC1表達（平均光密度）差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

表1 黏蛋白1在胃黏膜上皮細胞系和低分化胃腺癌細胞系中的表達

3 討論

MUC1是一種在上皮性腫瘤高度或異常表達的膜糖蛋白，是腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移及易感性等有關(guān)的重要基礎(chǔ)[1]，MUC1在所有正常及癌變的多種組織中均表達，而在間葉組織來源的淋巴結(jié)中不表達，因此可作為某些上皮腫瘤發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的有效標(biāo)志物[2]。

本實驗中，應(yīng)用間接免疫熒光法對MUC1在GES-1和BGC-823中的表達和定位進行檢測。實驗結(jié)果顯示，MUC1在兩種細胞系中的表達是有差異性的。侵襲和轉(zhuǎn)移潛能高的BGC-823中MUC1的表達率高于GES-1，這說明MUC1在細胞中的異常表達加速了腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，暗示著 MUC1基因的產(chǎn)物以某種方式參與了致癌和轉(zhuǎn)移過程。

MUC1基因編碼Ⅰ型跨膜胞膜表面多種腫瘤細胞內(nèi)MUC1呈過度表達，以往對結(jié)腸癌、胰腺癌及乳腺癌的研究發(fā)現(xiàn)，過度表達的MUC1可賦予腫瘤生長與轉(zhuǎn)移性質(zhì)，使腫瘤侵襲性增加[3-6]。MUC1促進腫瘤細胞增殖可能與以下兩條信號通道活化有關(guān)：一是核因子-κB（NF-κB）信號通道活化，另一機制涉及Wnt/β-連環(huán)蛋白（β-catenin）信號通道活化。已發(fā)現(xiàn)MUC1基因啟動子區(qū)有κB結(jié)合位點，而胃癌等多種癌腫中存在NF-κB活化[7-8]，活化的NF-κB作為細胞增殖促進因子及抗凋因子可以促進腫瘤細胞增殖；另外，NF-κB作為轉(zhuǎn)錄因子反過來促進MUC1等下游基因轉(zhuǎn)錄，進一步促進腫瘤細胞增殖。MUC1分子末端與β-連環(huán)蛋白相結(jié)合后定位于細胞核內(nèi)，參與細胞周期素D1（cyclin D1）等下游基啟動子活化，上調(diào)細胞周期素D1等基因表達，促進腫瘤細飽增殖[9-10]。

MUC1在腫瘤細胞中異常過量表達，這與MUC1的C-ter亞基介導(dǎo)的C-Src信號途徑有關(guān)[11]，其過量表達可以抑制細胞凋亡、促進相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，并導(dǎo)致細胞轉(zhuǎn)化。MUC1亦可通過在細胞表面的過度表達減小細胞-細胞、細胞-細胞外基質(zhì)的黏附使腫瘤細胞易于從原發(fā)部位脫離，從而更利于腫瘤的轉(zhuǎn)移。Beya等[12]提出了腫瘤干細胞（cancer stem cell）的概念，C1arke等[13]首次成功地從乳腺癌分離篩選出表達CD44+和ESA的細胞，在小鼠實驗中證實了腫瘤干細胞的存在，有學(xué)者認為，MUC1是胃癌腫瘤干細胞的另一個重要標(biāo)志物。因此，筆者下一步的工作重點將集中探討MUC1在胃癌的侵襲和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮的具體作用，并作更深一步的研究，為以后利用細胞系研究腫瘤的轉(zhuǎn)移和基因治療實驗提供了理論基礎(chǔ)和可行性依據(jù)。

MUC1表達可作為胃癌惡性程度高低的標(biāo)志，進一步探討MUC1表達與胃癌發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移的關(guān)系，對指導(dǎo)臨床診斷、判斷預(yù)后及腫瘤免疫治療有很重要的意義[14]。但由于胃癌發(fā)生和轉(zhuǎn)移是一個涉及多環(huán)節(jié)的復(fù)雜過程，結(jié)合其他基因表達的多因素綜合分析，有益于提高對轉(zhuǎn)移機制的深入認識，更利于為臨床治療提供正確指導(dǎo)。

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