李豐伯 汪傳友 姚劍飛 方樂金

(黃山學院，黃山，245041)(黃山風景區(qū)園林局)(黃山學院)

黃山是著名的風景名勝區(qū)、世界“文化與自然”遺產(chǎn)地和世界地質公園。黃山五絕之一的奇松更是譽滿海內(nèi)外。黃山松(Pinus taiwanensis Hayata)生長在海拔1 400 m以上的核心景區(qū)，是黃山森林植被景觀的重要組成部分，占景區(qū)林地面積1/3以上，達5 000 hm2［1］。

自20世紀70年代至今，高海拔景點中的玉屏峰、天都峰、蓮花峰、白云溪、光明頂、飛來石、回音壁、排云樓、松林峰、丹霞峰、獅子峰、貢陽峰、始信峰等主干道及景點周圍頻發(fā)大面積紅蜘蛛危害［2］，其發(fā)生時間從3月下旬至11月份結束，5—9月份為高峰期，風力傳播，吸食1—2年生針葉。針葉由基部發(fā)黃開始至整束針葉發(fā)黃變褐直至小枝枯死。成片的受害林猶如過火林，嚴重影響松林景觀和松林群落的生長。經(jīng)鑒定，該種紅蜘蛛為細紋新須螨(Cenopalpus lineola.)［3］。

為保護黃山松和風景區(qū)森林景觀，黃山風景區(qū)每年均使用多種化學藥劑進行防治，鑒于風景區(qū)游客密集，地勢險要，氣候多變，化學藥劑對景區(qū)其他生物具有潛在毒性，影響整個生態(tài)環(huán)境及細紋新須螨的耐藥性，景區(qū)防治人員認識到單一的化學防治不能達到預期效果。故選用森林本體具有的生物防治菌進行生物防治。

環(huán)鏈擬青霉(Paecilomyces cateniannulatus)是森林生態(tài)中數(shù)量和分布僅次于球孢白僵菌的優(yōu)勢蟲生真菌。系統(tǒng)研究森林本體具有的較強防治效果的生防菌，可以降低對環(huán)境有潛在危險的化學藥劑使用量，在增強防治效果、拓展防治林業(yè)害蟲新思路上具有重要意義。

1 材料與方法

菌種:環(huán)鏈擬青霉X－1于2005年采集自云南西雙版納，由貴州大學真菌資源研究所惠贈。

培養(yǎng)基:A.馬鈴薯葡萄糖斜面培養(yǎng)基［4］;B.綜合馬鈴薯培養(yǎng)基［5］。

試驗用黃山松:室內(nèi)試驗用黃山松枝條由黃山學院試驗田培育，自然生長，不噴灑任何農(nóng)藥及微肥。

細紋新須螨:室內(nèi)試驗用細紋新須螨由黃山風景區(qū)核心景區(qū)光明頂觀測站獲得，于黃山學院微生物學實驗室飼養(yǎng)擴繁后提供。

環(huán)鏈擬青霉孢子懸浮液制備:向培養(yǎng)的斜面培養(yǎng)基倒入適量0.05%吐溫－80溶液，用接種環(huán)輕輕刮下孢子，充分振蕩10 min以上。孢子團完全散開以后用濾紙除去菌絲等雜質，得到一定孢子密度的懸浮液，作為生物測定的原液。

生物測定細紋新須螨方法:摘取長有細紋新須螨的黃山松葉柄，用營養(yǎng)液浸濕的脫脂棉球包裹葉柄，然后，將葉片(葉柄不浸入)浸入預定孢子密度的燒杯中2～3 s立即取出，室溫下將細紋新須螨和葉片晾干，置于鋪濾紙的培養(yǎng)皿內(nèi)。每皿1柄黃山松，每柄15～40頭蟲，25℃恒溫培養(yǎng)。每3 d給棉球加1次無菌水，每日光照10 h，鏡檢死亡率，連續(xù)8 d。在試驗條件(平均氣溫23℃，晝夜溫差6℃左右)下，計算環(huán)鏈擬青霉的孢子懸浮液對細紋新須螨的致死率。

致死率=(擬青霉菌絲包圍的蟲數(shù)/總蟲數(shù))×100%。

將死蟲在23～27℃條件下培養(yǎng)箱培養(yǎng)，觀察并鑒定蟲體上長出的菌絲，確定是否目的菌株侵染導致。

所得數(shù)據(jù)用SPSS 13.0軟件進行分析。計算校正死亡率，根據(jù)Finny機率值法計算半致死密度(LC50)，對孢子密度對數(shù)值(X)與各齡的幼蟲死亡機率值(Y)進行相關性分析;計算累積校正死亡率，根據(jù)Finny機率值法計算出半致死時間(LT50)，針對死亡率超過50%以上的劑量，對時間的對數(shù)值(X')與各齡的幼蟲死亡機率值(Y)進行相關性分析。

2 結果與分析

2.1 細紋新須螨室內(nèi)感染環(huán)鏈擬青霉后的感病癥狀

對細紋新須螨施用菌劑后，其運動速度明顯加快，部分細紋新須螨開始結網(wǎng)，1 d后發(fā)現(xiàn)，在葉鞘基部的網(wǎng)上，數(shù)個細紋新須螨群居，動作遲緩，不進食。2 d后發(fā)現(xiàn)較多幼蟲不能正常蛻皮，蛻皮到腹末不能正常蛻下，蛻下的殼體比較破碎，同時也觀察到有其他細紋新須螨協(xié)助蛻皮的情形。3 d后，死亡螨開始增多，螨體顏色開始加深。顯微染色觀察，體內(nèi)布滿菌絲。蟲體牢固抱住松枝或網(wǎng)。4 d后，菌絲突破體表，出現(xiàn)白色菌絲。

2.2 室內(nèi)試驗中環(huán)鏈擬青霉對不同齡的細紋新須螨的致死率

從表1中可以看出環(huán)鏈擬青霉對細紋新須螨的2齡、3齡幼蟲均表現(xiàn)出了較高的致病力。無論是低齡幼蟲還是高齡幼蟲，試蟲的死亡率隨著孢子密度的升高而增加。當孢子密度為2.0×107～11.0×107個·mL－1時，引起幼蟲死亡率44.4%～76.3%，各齡幼蟲的敏感性不一，在相近的孢子密度下，低齡幼蟲的死亡率明顯高于高齡幼蟲。根據(jù)Finny機率值法，經(jīng)相關回歸分析得出死亡率機率值(Y)與孢子密度對數(shù)值(X)的回歸直線方程和相關性(表2)?？ǚ綑z驗的結果小于χ2(3，0.05)=7.04，因此，毒力回歸直線與實際相符。從表2中還可以看出，LC50隨著蟲齡的增大而升高。2齡幼蟲最敏感，LC50為6.196 7×107個·mL－13齡幼蟲LC50最高，為7.134 5×107個·mL－1，表明低齡幼蟲對擬青霉的敏感性要高。

表1 環(huán)鏈擬青霉對不同齡的細紋新須螨的致死率

表2 環(huán)鏈擬青霉對細紋新須螨的毒力回歸直線

通過對細紋新須螨的致病性測定表明，該菌對細紋新須螨2、3齡幼蟲表現(xiàn)出較高的致病力。并試驗表明3～4 d是死亡高峰。根據(jù)Finny機率值法，得出細紋新須螨死亡率機率值(Y)與處理時間的對數(shù)值(X)的回歸直線方程和相關性(表3)?？ǚ綑z驗的結果均小于χ'2(3，0.05)=6.45，所得的毒力回歸直線與實際基本相符。LT50隨著細紋新須螨幼蟲的蟲齡增大而增大，蟲齡相同時隨著孢子密度增加而減小。2齡幼蟲經(jīng)孢子密度10.0×107個·mL－1處理的LT50最小，為0.824 6。故同齡幼蟲，孢子密度越大，LT50越小。

表3 環(huán)鏈擬青霉對細紋新須螨致死中時間回歸直線

3 結論與討論

俗稱紅蜘蛛的農(nóng)業(yè)、林業(yè)螨類種類繁多，其幼螨和若螨均能危害農(nóng)業(yè)及林業(yè)各種作物?；瘜W藥劑的長期使用，使該螨抗藥性增強，甚至出現(xiàn)了越噴蟲越多的現(xiàn)象。陸恒等［6］用13種殺螨化學制劑對柑橘、桃樹紅蜘蛛做了田間防效評價。利用生物制劑或植物農(nóng)藥制劑對柑橘紅蜘蛛防治也做了較詳細的論述，防治效果同化學制劑也做了比較［7－10］。但對于風景區(qū)特定環(huán)境中的細紋新須螨的研究未見報道，特別是利用生物防治真菌對風景區(qū)螨類的防治，將會是一個新的研究方向。

本研究中環(huán)鏈擬青霉對細紋新須螨表現(xiàn)了較強的致病能力，利用該菌防治細紋新須螨將具有很大的開發(fā)潛力。從試驗結果可以看出，時間越長累積校正死亡率越高，相同蟲齡下孢子密度越高，LT50越低。同時本研究還根據(jù)LC50大小證明，蟲齡越低，死亡率越高;蟲齡越高，LC50越高。因此，在實踐應用中，應該著重防治2齡幼蟲。昆蟲病原真菌對寄主的致病性受到多種因子的影響，如病原菌孢子密度、寄主蟲齡期的大小、環(huán)境的濕度和溫度以及作用時間的長短等因子都會對致病力有較大的影響。根據(jù)其生物學特性，本研究的試驗設計選擇的是較好的孢子萌發(fā)、生長條件，在相對濕度較高的情況下進行，有利于菌絲生長，這可能是致病力高的一個原因。但是用在例如黃山風景區(qū)等氣候多變、濕度較高、晝夜溫差大的環(huán)境中，某些不確定因素或許成為影響防治效果的主導因素，故還需要做進一步研究。

［1］吳中倫.安徽黃山黃山松的初步觀察［J］.林業(yè)科學，1963，8(2):114－126.

［2］吳俊，汪傳友，方樂金.黃山松紅蜘蛛(細紋新須螨)危害現(xiàn)狀及生物防治策略［J］.黃山學院學報，2010，12(5):56－58.

［3］王冬生，袁全昌，馬恩沛.細紋新須螨雄螨的發(fā)現(xiàn)［J］.上海農(nóng)業(yè)學報，1993，9(2):77－78.

［4］蒲蟄龍，李增智.昆蟲真菌學［M］.合肥:安徽科學技術出版社，1996.

［5］李影林.培養(yǎng)基手冊［M］.長春:吉林科學技術出版社，1991:207－222.

［6］陸恒，陳炳旭，董易之，等.13種殺螨劑對柑橘紅蜘蛛田間防效評價［J］.廣東農(nóng)業(yè)科學，2009(9):96－99，107.

［7］張權炳.0.26%苦參堿水劑防治柑橘紅蜘蛛和蚜蟲試驗［J］.中國南方果樹，2011，40(1):37－41.

［8］李富山.0.5%藜蘆堿粉劑防治柑橘紅蜘蛛初報［J］.廣西熱帶農(nóng)業(yè)，2010(2):51－52.

［9］曾令玲，何健.0.9%阿維菌素乳油防治柑橘紅蜘蛛田間藥效試驗［J］.現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2009(7):103.

［10］王向陽，李昌春，劉偉，等.5%除蟲菊素乳油防治桃樹紅蜘蛛田間藥效試驗［J］.安徽農(nóng)學通報，2010，16(3):106－107.