隋博文 趙法政 劉春紅

黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院（黑龍江哈爾濱150040）

心力衰竭（HF）是世界范圍內(nèi)嚴(yán)重危害公眾健康的疾病之一，其發(fā)病率和死亡率呈上升趨勢(shì)。近年來(lái)，中醫(yī)藥防治心力衰竭取得了一定成果，但對(duì)于其作用機(jī)制的研究尚不夠深入。以養(yǎng)心活血利水法為組方的中藥是課題組多年來(lái)治療HF的方藥，臨床療效確切。筆者擬通過(guò)觀察阿霉素所致大鼠HF模型及中藥干預(yù)過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體α（PPARα）表達(dá)的角度來(lái)闡述養(yǎng)心活血利水法治療本病的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1．1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)wistar大鼠80只，購(gòu)自哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，體質(zhì)量200～250g，均為雄性。

1．2 試藥及儀器 養(yǎng)心活血利水法組方的中藥湯劑主要由葶藶子、五加皮、白參、三七粉等組成（由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥物制劑室提供，質(zhì)量濃度為0．172g/mL）；鹽酸阿霉素（深圳萬(wàn)樂藥業(yè)有限公司）；卡維地洛（深圳清華源興藥業(yè)有限公司）。BI-2000圖像/免疫組織化學(xué)分析系統(tǒng)（成都泰盟科技有限公司），光學(xué)顯微鏡（Olympus，日本），積分光密度分析軟件 Simple PCI（v5．2，Compix Inc．，美國(guó)），免疫組化染色試劑盒、DAB顯色試劑盒（AR1022）（武漢博士德生物技術(shù)有限公司），山羊抗 PPARα多克隆抗體（SANTA CRUZ，美國(guó)）

1．3 分組與造模 大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后按隨機(jī)數(shù)字表分為正常對(duì)照組、模型組、卡維地洛組、中藥組。按文獻(xiàn)［1］的方法加以改進(jìn)，將鹽酸阿霉素用注射用水配制成2mg/mL溶液，按4mg/kg（2mL/kg）腹腔注射造模，每周1次，共4周，累積總量16mg/kg；對(duì)照組大鼠腹腔注射等量生理鹽水。

1．4 給藥方法 末次注射1周后給予藥物干預(yù)，對(duì)照組及模型組予生理鹽水1mL/100g灌胃治療；中藥組給予中藥灌胃治療，每次2mL（給藥劑量按人與動(dòng)物體質(zhì)量-劑量換算公式［2］）；卡維地洛組給予卡維地洛2mg/（kg·d）。每日2次給藥，持續(xù)4周。

1．5 免疫組化法測(cè)定PPARα的表達(dá) 用藥后4周，各組隨機(jī)取8只大鼠，用5%戊巴比妥鈉20mg/kg腹腔注射麻醉，消毒皮膚，打開胸腔，接自制灌注裝置順血流方向灌注生理鹽水，沖洗去除循環(huán)中的血細(xì)胞，取左心室。用10%甲醛固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，切成10μm厚的切片，脫蠟，鏡下觀察組織形態(tài)學(xué)。免疫組化法（按試劑盒操作進(jìn)行）測(cè)定PPARα的表達(dá)。在40倍物鏡下采集圖像。從每張切片中選取一有代表性區(qū)域，以序列方式4×5連續(xù)取20個(gè)高倍視野（×400倍），對(duì)SAB切片免疫組化染色胞漿中的陽(yáng)性表達(dá)進(jìn)行定量分析，計(jì)算每視野陽(yáng)性染色的積分光密度（iOD）值，并取20個(gè)視野的積分光密度之和進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

1．6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用 SPSS 13．0統(tǒng)計(jì)軟件。 數(shù)據(jù)以（x±s）表示，組間比較用t檢驗(yàn)。P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2．1 養(yǎng)心活血利水法對(duì)HF大鼠心肌組病理學(xué)影響 光鏡下模型組可見心肌有不同程度的顆粒變性和空泡變性、壞死，心肌組織結(jié)構(gòu)明顯松弛，間質(zhì)纖維化與心肌相連，可見明顯間質(zhì)面積增大。而中藥組可見心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)較清晰，肌纖維連接較完整，少量壞死，心肌纖維化少見?？ňS地洛組可見心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)較清晰，間質(zhì)纖維組織增生不明顯，心肌組織結(jié)構(gòu)稍松弛；細(xì)胞核肥大，異性不明顯，間質(zhì)內(nèi)增生的膠原纖維較模型組明顯減少。

2．2 養(yǎng)心活血利水法對(duì)心肌組織PPARα表達(dá)的影響 模型組心肌組織PPARα 表達(dá)明顯均低于正常對(duì)照組 （P＜0．05），染色顆粒位于細(xì)胞核，有的細(xì)胞核呈雙重染色。中藥組和卡維地洛組心肌組織PPARα 表達(dá)高于模型組 （P＜0．05），中藥組和卡維地洛組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05）。

3 討 論

PPARα屬于核受體轉(zhuǎn)錄因子家族，與配體結(jié)合后同維甲酸受體（RXR）形成異源二聚體，在共激活因子的參與下作用于靶基因上特異的PPAR應(yīng)答元件，啟動(dòng)一系列調(diào)控糖脂代謝的基因轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)。PPARα參與了心肌游離脂肪酸利用的每一個(gè)步驟來(lái)調(diào)節(jié)游離脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)、酯化和氧化。從胎兒到成年的發(fā)育過(guò)程中，心臟PPARα表達(dá)逐漸增加；與之相應(yīng)，受PPARα調(diào)控的參與脂肪酸氧化的目的基因，如中鏈脂酰輔酶A脫氫酶（MCAD）和肌型肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶1（M-CPT-1）等表達(dá)也增多，能量利用也從胚胎期以葡萄糖及丙酮酸為主，成年后以游離脂肪酸為主。當(dāng)心肌肥厚和心功能不全時(shí)PPARα及其調(diào)節(jié)的目的基因表達(dá)和活性下降，游離脂肪酸的氧化利用障礙，心肌產(chǎn)生能量代謝障礙，進(jìn)而導(dǎo)致和促進(jìn)心力衰竭的發(fā)生和進(jìn)一步發(fā)展［3］。 Morgan 等［4］認(rèn)為進(jìn)展性HF患者心肌組織脂肪酸氧化基因下調(diào)與PPARα和RXRα表達(dá)減少有關(guān)，上述通路與基因水平改變了HF代謝重構(gòu)。

表1 各組心肌組織PPARα 表達(dá)比較 （iOD，±s）

表1 各組心肌組織PPARα 表達(dá)比較 （iOD，±s）

與模型組比較,△P＜0．05。

組 別 n PPARα正常對(duì)照組 8 89．347±2．548△模型組 8 39．876±3．421中藥組 8 68．587±2．364△卡維地洛組 8 63．842±2．421△

本實(shí)驗(yàn)從中醫(yī)臟腑理論出發(fā)，結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究進(jìn)展，認(rèn)為心力衰竭的病機(jī)根本在于“氣虛血瘀水滯”所致。創(chuàng)立了以“養(yǎng)心活血利水”為法的方藥。方中白參，甘平補(bǔ)益心氣為君，三七活血散瘀，葶藶子利水消腫為臣藥，佐以五加皮補(bǔ)肝腎利水消腫。諸藥合用共奏養(yǎng)心活血利水之功，標(biāo)本兼治，諸證自解。

本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明以養(yǎng)心活血利水法組方的中藥湯劑可能通過(guò)提高PPARα表達(dá)來(lái)改善能量代謝的途徑，從而達(dá)到治療和改善心力衰竭臨床癥狀的作用。

［1］ 李玉玲，楊建業(yè)，唐俊明，等．阿霉素誘導(dǎo)大鼠心衰模型不同方案的比較［J］．中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志，2006，16（2）：95－96．

［2］ 李儀奎．中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)［M］．上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2006：38．

［3］ 隋博文，李竹英，敖杰男．心力衰竭與代謝重構(gòu)［J］．中國(guó)心血管病研究，2007，11（5）：852．

［4］ Morgan E E， Chandler M P，Young M E，etal．Dissociation between gene and proteinexpression ofmetabolic enzymes in a rodentmodel of heart failure［J］．Eur JHeart Fail，2006，8（7）：687-693．