肖佳尚

廣州市黃埔區(qū)食品藥品檢驗所，廣東廣州 510700

復(fù)方益腎膠囊由淫羊藿、五味子、地骨皮、熟地黃、黃芪等多味中藥為原料制成的中藥復(fù)方制劑。具有補虛損，益房勞，防早衰作用。用于房勞、陽痿、性欲低下、早泄。淫羊藿是復(fù)方益腎膠囊的君藥，其藥用有效成分主要是淫羊藿苷（I-cariin）。本品為復(fù)方中藥制劑，為了有效地控制和提高本制劑的質(zhì)量，質(zhì)量標準中以其主要成分淫羊藿苷作為含測指標，采用高效液相色譜法進行測定[1-6]。本文建立的高效液相色譜法分離測定了復(fù)方益腎膠囊中淫羊藿苷成分的含量，獲得很好效果，為中藥復(fù)方益腎膠囊的質(zhì)量標準研究提供了依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀：Waters 2695 separation module，Waters 2424 ELS detector；Waters Empower 2色譜工作站（美國沃特斯儀器有限公司）；XS205（十萬分之一）天平（瑞士梅特勒-托利多衡具有限公司）；Millipore超純水系統(tǒng)（美國密理博儀器有限公司）。

1.2 試藥

淫羊藿苷（中檢所提供，含測用，批號：0737-200111）；乙腈（色譜純，Tedia Company，USA）；復(fù)方益腎膠囊規(guī)格：0.4 g/粒。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件的選擇

Diamonsil C18（4.6 mm×250 mm，5μm）色譜柱（迪馬公司產(chǎn)），乙腈-0.1%磷酸（25∶75）為流動相，柱溫 35℃，流速0.9 ml/min，檢測波長為270 nm。在此色譜條件下，淫羊藿苷與樣品中其他組分分離良好，理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計＞3 000。 見圖 1、2。

2.2 供試品溶液的制備

取本品裝量差異項下內(nèi)容物0.5 g，精密稱定，置于100 ml具塞錐形瓶中，精密加甲醇40 ml，稱定重量，超聲處理20 min，放冷，再稱重，用甲醇補足減失的重量，搖勻，微孔濾膜（0.45 μm）濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.3 對照品溶液的制備及線性關(guān)系考察

精密稱取淫羊藿苷對照品9.99 mg，置于25 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度[7]，搖勻，精密吸取1 ml，置于10 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液；分別精密吸取上述對照品溶液各 5、10、15、20、30 μl，分別注入液相色譜儀，照上述色譜條件測定淫羊藿苷峰面積，以對照品進樣量 X（g）為橫座標、峰面積值 Y（mV·s）為縱座標，繪制標準曲線，得回歸方程為：Y=1 923 806X-24 140（r=0.999 6）；線性范圍為 0.203 6～1.221 6 μg。

2.4 精密度試驗

精密吸取上述對照品溶液10 μl,重復(fù)進樣5次,測定淫羊藿苷峰面積值，求得淫羊藿苷峰面積值平均值為745 950，RSD為0.7%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗

精密稱取本品0.5 g，照上述供試品溶液制備方法制備供試品溶液，精密吸取10 μl，照上述條件，每隔一定時間進樣，測定淫羊藿苷峰面積值，求得淫羊藿苷峰面積值平均值為1 253 261，RSD為2.5%，測定結(jié)果表明樣品在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.6 重復(fù)性試驗

精密稱取本品5份，每份0.5 g，照上述供試品溶液制備方法制備，精密吸取供試品溶液10 μl，進樣，測定，計算含量，求得淫羊藿苷含量平均值為2.06 mg/粒，RSD為2.2%。結(jié)果表明本法測定的重復(fù)性較好，見表1。

表1 重復(fù)性試驗

2.7 準確度試驗

采用加樣回收法，取已知含量樣品（淫羊藿苷含量為：2.06 mg/粒）6份，精密稱取各0.25 g，分別精密加入淫羊藿苷對照品，照供試品溶液制備方法制備，按正文色譜條件進樣，測定，計算，求得淫羊藿苷平均回收率為98.7%，RSD為1.9%。結(jié)果說明本法回收良好，見表2。

表2 回收率試驗結(jié)果

2.8 陰性對照溶液的制備及試驗

取缺淫羊藿的群藥按處方比例，混合均勻并研細，精密稱取1.0 g精密稱定，置于200 ml具塞錐形瓶中，精密加甲醇80 ml，稱定重量，超聲處理20 min，放冷，再稱重，用甲醇補足減失的重量，搖勻，微孔濾膜（0.45 μm）濾過，取續(xù)濾液，作為不含淫羊藿的陰性對照溶液。照樣品測定項下的方法測定，結(jié)果表明在淫羊藿苷對照品吸收峰位置處無干擾。見圖3。

2.9 樣品的測定

照上述方法，對本制劑三批樣品進行淫羊藿苷的含量測定。見表3。

表3 含量測定結(jié)果

3 討論

3.1 供試品溶液的制備

由于淫羊藿苷類成分在甲醇中的溶解度比較大，所以筆者在提取時選用甲醇為溶劑進行超聲提取，經(jīng)回收試驗證明此方法可行。

3.2 檢測波長的選擇

對樣品與對照品的淫羊藿苷的進行UV掃描和HPLC檢測[8]，淫羊藿苷在270 nm處有最大吸收，在該波長處測定，各組分分離良好，其他雜質(zhì)的干擾很少，幾乎無干擾，滿足含量測定要求。

3.3 流動相的選擇

HPLC測定選擇了乙腈-0.2%磷酸（20∶80），乙腈-0.2%磷酸（25∶75），乙腈-0.1%磷酸（40∶60）,乙腈-0.1%磷酸（25∶75）等幾種流動相體系，通過比較分離情況，確定了乙腈-0.1%磷酸（25∶75）為最佳流動相，再加上制劑成分復(fù)雜，為獲得滿意分析時間的要求，故采用酸性洗脫劑，使各成分得到了良好的分離效果，符合含量測定要求。

本研究建立的HPLC法，可以測定復(fù)方益腎膠囊中主要成分淫羊藿苷的含量。本研究采用的HPLC法，具有操作方法簡單便捷，分析條件容易準確控制，使待測成分易于分離等優(yōu)點，此方法精密度高，分離度良好，重現(xiàn)性和回收率好，為復(fù)方益腎膠囊的質(zhì)量標準的提高提供了科學依據(jù)。

[1]黃璐敏.HPLC法測定補腎強身膠囊中淫羊藿苷的含量[J].中國藥事,2005,19(7)：429.

[2]李社花,何繼祥,李應(yīng)芬,等.益腎健骨片中淫羊藿苷的含量測定[J].中成藥,2005,27(8)：附 2.

[3]丁偉姣,尹松鶴.四物合劑的薄層色譜鑒別[J].時珍國醫(yī)國藥,2003,14(8)：479.

[4]陳家進,劉俊怡,蘇娟.復(fù)方益芪顆粒質(zhì)量標準研究[J].中成藥,2005,27(2)：168.

[5]佘孟祥.濟生腎氣丸中牛膝的薄層色譜鑒別[J].湖北中醫(yī)雜志,2000,22(1)：45-9.

[6]徐東,孫立立,楊書彬,等.高效液相色譜法測定補腎寧膠囊中淫羊藿苷的含量[J].中成藥,2001,23(5)：331-3.

[7]張林松.HPLC法測定復(fù)方益腎顆粒中淫羊藿苷的含量[J].中草藥,2005,36(2)：221.

[8]國家食品藥品監(jiān)督管理局.中華人民共和國藥典(2010年版)一部[S].2010：附錄 30-31,36-38.