苑相愛

(山東省安丘市中醫(yī)院，山東 安丘 262100)

心肌炎顆粒是我院自行研制的醫(yī)院制劑，由丹參、地黃、元參、苦參、麥冬等中藥經科學方法提取精制而成，具有清熱解毒、益氣養(yǎng)陰、養(yǎng)心復脈的作用，主要用于病毒性心肌炎的治療。丹參是方中主藥，為控制產品內在質量，保證療效，筆者以其主要成分丹酚酸B的含量為指標，采用高效液相色譜（HPLC）法[1]進行了定量分析，現報道如下。

1 儀器與試藥

LC－2010型高效液相色譜儀（日本島津）；十萬分之一電子分析天平（日本島津）；定量毛細管（Drummond Scientific Co.USA）；超純水器（Millipore）；超聲波發(fā)生器（上海吉理超聲儀器廠）。硅膠G板（青島海洋化工廠）；中性氧化鋁（100以上）；丹酚酸B對照品（供含量測定用，中國藥品生物制品檢定所，批號為11562－200504）；心肌炎顆粒（本院制劑室提供，批號分別為 080503，080603，080607）；陰性樣品（自制）；甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Hypersil ODS 柱(250 mm ×4.6 mm，5!m)；流動相：甲醇 －乙腈 －甲酸 －水(30∶10∶1∶59)；檢測波長：286 nm；柱溫：室溫。

2.2 溶液制備

精密稱取常溫減壓干燥12 h的丹酚酸B對照品1.4 mg，加甲醇至10 mL，制成質量濃度為0.14 g/L的對照品溶液。取本品5 g，研細，混勻，精密稱取1.0 g，置20 mL量瓶中，加70%甲醇10 mL,超聲提取30 min,精密量取1 mL至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液。取處方中除丹參外的其余各藥，按供試品處方量投料比例制成陰性對照品，再按供試品溶液的制備方法制得陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

系統適用性試驗：分別吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液各10!L，注入液相色譜儀，測定。理論塔板數按丹酚酸B峰計算應不低于3 000，并且與其他成分峰分離良好。所得陰性對照品溶液色譜圖中，在供試品溶液色譜中丹酚酸B相應位置上未出現吸收峰，表明處方中其他各味藥對丹酚酸B色譜峰測定無干擾。結果見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

標準曲線制備：分別吸取一定量的丹酚酸B對照品貯備液，加體積分數為75%的甲醇稀釋成丹酚酸B質量濃度為2,4,8,12,16,20,24!g/mL的溶液。依次進樣10!L，每個質量濃度測定3次以上。以峰面積（Y）對質量濃度（X）進行回歸，得回歸方程 Y=9.85 X －1.25，r=0.999 8（n=7）。結果表明，丹酚酸 B 質量濃度在2～24!g/mL范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：取質量濃度為0.14 g/L的丹酚酸B對照品溶液10!L，連續(xù)測定5次。結果其峰面積的 RSD為1.97%（n=5），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：取同一批（批號為080503）供試品溶液，分別于0，2，4，6，8，10，12 h 時進樣，按上述色譜條件測定。結果峰面積的RSD為1.39%（n=7），表明供試品溶液在12 h內穩(wěn)定。

重現性試驗：取同一批（批號為080603）樣品6份，按供試品溶液制備方法處理并依法測定。結果的 RSD為2.6%（n=6），表明方法重現性良好。

加樣回收試驗：取已知含量的樣品適量，加入對照品溶液（質量濃度分別為 2.5，12.0，22.0!g/mL），平行操作 2 次，依法測定，計算回收率。結果見表1。

表1 丹酚酸B加樣回收試驗結果(n=6)

2.4 樣品含量測定

取樣品3批，依法測定丹酚酸B的含量。結果批號為080503，080603，080607 的樣品中，丹酚酸 B 的含量分別為 0.1430，0.1510，0.135 6 mg/g（n=3）。

3 討論

丹酚酸B藥理作用明確且在丹參藥材中的含量較高，2005年版《中國藥典（一部）》規(guī)定丹參藥材中丹酚酸B含量不得低于3%[1],因此以丹酚酸B為指標可有效控制該制劑質量。由于丹酚酸B受熱時不穩(wěn)定,因此在樣品制備方法上選擇甲醇超聲提取。采用甲醇－乙腈－甲酸－水（30∶10∶1∶59）為流動相進行色譜分析，結果分離效果良好，峰形較理想。方法學考察結果表明，該法操作簡便、結果準確、重現性好,可有效控制心肌炎顆粒的質量。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學工業(yè)出版社,2005:附錄"B，52 －53.