付永霞

白鮮皮為蕓香科白鮮屬植物白鮮干燥根皮,具有清熱燥濕、祛風(fēng)解毒、抗菌抗癌的作用,通過正交實驗優(yōu)選白鮮皮的提取工藝,以白鮮堿為指標,研究白鮮堿含量與抑菌效果的關(guān)系,通過該實驗,證明了白鮮皮的抑菌作用。

本實驗的目的是研究中藥白鮮皮的有效成分對細菌,真菌的殺菌、抑菌作用。我國在中藥抑菌實驗上的研究已經(jīng)取得了一定的成功[1],推動了中藥事業(yè)的發(fā)展,具有重要的理論和臨床應(yīng)用價值。

白鮮皮概述:白鮮皮為蕓香科白鮮屬植物白鮮干燥根皮。具有清熱燥濕、祛風(fēng)解毒、抗菌抗癌的作用。臨床上用于治療濕熱瘡毒、黃水淋漓、濕疹等,并對心血管及血液病有一定的療效[2-3]。

1 化學(xué)成分

1.1 生物堿類化合物 白鮮皮的根中含有白鮮堿,異白鮮堿,白鮮皮堿,茵芋堿,γ-崖椒堿,前茵芋堿,異斑佛林草堿,葫蘆巴堿,膽堿,去甲茵芋堿[7]。

1.2 檸檬苦素類化合物 白鮮皮的根中含有梣酮,異白蠟樹酮,6β-羥基白蠟樹酮,檸檬苦素,檸檬苦素地噢酚,黃柏酮酸,黃柏內(nèi)酯,白鮮腦交酯,6-甲氧基異白鮮堿[6]。

1.3 甾體類化合物 白鮮皮的根中含有孕烯醇酮,如忒文,β谷甾醇,菜油甾醇等。

1.4 香豆素和黃酮類化合物 白鮮皮的地上部分含有補骨酯內(nèi)酯,花椒毒素,東莨菪素,槲皮素,異槲皮素,木犀草素,3'-O-甲基花旗松素,5-7-4'-三羥基-3'-甲氧基異黃酮,漢黃芩素[8]。

1.5 倍半萜和倍半萜甙類化合物 白鮮皮的根中含有 β-欖香醇,白鮮甙 A-N,胸腺嘧啶核苷,白鮮甙 A[9]。

1.6 多糖 白鮮皮中含有粗多糖,采用硫酸-苯酚比色法測定白鮮皮粗多糖中總糖含量。白鮮皮粗多糖收率為 9.7%,總糖含量為 79.20%[10]。

2 藥理作用研究概況

2.1 抗炎作用 白鮮皮水提物對半抗原 2,4,6-三硝基氯苯所致的接觸性皮炎及顆粒性抗原羊紅細胞所致的足拓反應(yīng),在抗原攻擊前給藥有明顯的抑制作用,同時白鮮皮還明顯地抑制二甲苯所致的小鼠耳腫脹及蛋清所致的小鼠足跖炎癥反應(yīng)。此外,其對小鼠抗羊紅細胞抗體的產(chǎn)生有明顯的抑制作用[11-12]。

2.2 抗腫瘤作用 散結(jié)片(主要成分為白鮮皮、白附子)對肝癌細胞體內(nèi)外均有顯著殺傷作用[13]。

2.3 抗菌作用 白鮮皮的水浸劑及乙醇提取物均有抗菌作用[14-15]。

2.4 抗生育作用 白鮮皮對家兔及豚鼠的離體子宮有興奮作用,使子宮平滑肌強力收縮。白鮮皮甲醇提取物對交配后大鼠口服給藥能明顯降低生育率。從其甲醇提取物中分離的活性成分梣酮,具非雌激素樣抗生育活性[16]。

2.5 殺蟲作用 白鮮皮甲醇提取物具有較高的活性,石油醚萃取物及苯萃取物均對三齡粘蟲有拒食和毒殺活性。其活性成分為木岑酮[17]。

3 實驗與結(jié)果

材料:白鮮皮、乙醇;儀器:恒溫水浴鍋、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、紫外分光光度儀、無菌操作臺、搖床、恒溫培養(yǎng)箱。

4 藥液的制備

本實驗以白鮮堿為指標,利用正交實驗法優(yōu)選白鮮皮的提取工藝。影響白鮮皮有效成分提取率的因素有乙醇用量、回流時間、乙醇濃度。根據(jù)初步試驗結(jié)果擬定三因素四水平正交試驗進行提取工藝考察。見表1。

表 1 因素水平排列因素

取藥材 50g置于干燥的圓底燒瓶中,按表 2正交試驗表進行操作,回流 2次,趁熱過濾,合并兩次濾液,提取液最后都揮去乙醇,濃縮后減壓干燥.

表 2 L9(34)正交試驗表

5 白鮮堿含量的測定

5.1 待測樣品含量的測定 精密稱取 9個待測藥品 0.1 g,用 95%乙醇溶解,各加 1滴吐溫-80,超聲,定容 25 m l容量瓶內(nèi),使其充分溶解。過濾取續(xù)濾液 0.25 m l,定容 10 ml容量瓶內(nèi),測吸光度。95%乙醇做空白溶液。見表 2。

表 3 樣品的含量

表 4 穩(wěn)定性試驗結(jié)果

通過實驗說明,該樣品溶液比較穩(wěn)定。

5.2 樣品穩(wěn)定性試驗 將空白對照組樣品供試液在間隔 2 h、4 h、6 h、10 h、24 h的時間用同一測定方法所得到的測定結(jié)果,分光光度法是對被測液的吸光度A值進行考察。見表4。

6 抑菌實驗

6.1 菌株 大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉

6.2 供試藥物 中藥白鮮皮不同條件的醇提物。

6.3 培養(yǎng) 將大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌活化好后,用接種針挑取單個菌落,接種到新鮮的液體培養(yǎng)基中,搖床培養(yǎng)至混濁,用血球計數(shù)法數(shù)菌落。黑曲霉:將液體培養(yǎng)基倒入長有黑曲霉的試管內(nèi),搖勻,把上面的孢子涮下來,倒入滅過菌的錐形瓶內(nèi),備用。

6.4 菌液的稀釋 以大腸桿菌為例:取無菌平皿 6套,分別用記號筆標明 10-4、10-5各 3套,另取 5支盛有 900u l的液體培養(yǎng)基離心管,依次標是 10-1、10-2、10-3、10-4、10-5。

6.5 抑菌圈的測定 ①紙片的制備:用打孔機打成直徑約為 6 m m的紙片,每張紙片可吸水 10u l。紙片經(jīng)高壓滅菌,烘干備用;②抑菌圈:用無菌鑷子擺放紙片,采用逐片滴加的方法,滴加不同濃度的紙片,中間放空白對照,平放于實驗臺上1～2 h,使藥液滲入培養(yǎng)基表層,然后倒置 37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24h,觀察結(jié)果,測量抑菌圈直徑,重復(fù) 3次。見表 5。

表 5 藥液對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉產(chǎn)生的抑菌圈(m m)

通過抑菌實驗發(fā)現(xiàn),白鮮皮提取物對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌有抑菌效果,對白色念珠菌和黑曲霉無明顯抑菌效果。7號白鮮皮提取物對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌抑菌效果比較好。

7 結(jié)論

白鮮皮 7號提取物(乙醇濃度 75%、固液比 1:5、回流時間 2 h)對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌有較好的抑制作用,其白鮮堿含量是 0.7835%。

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