趙麗平 陸雪英 陳秋月 蔣瑞金 晉玲 趙善民 黃彥峰

廣西甜茶(Rub us suavissimus S.Lee)是薔薇科懸鉤子屬植物一個(gè)新種，主產(chǎn)于廣西桂林、金秀、桂平等縣。甜茶中含有甜茶素、茶多酚、蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素、黃酮以及鐵、鋅、鈣等礦物質(zhì)[1]。目前，有研究報(bào)道甜茶提取物有抗過敏和舒張支氣管作用[2-4]，國(guó)外報(bào)道，臨床上每天服用甜茶提取物可預(yù)防或改善炎癥、喉痛、花粉過敏和感冒引起的咳嗽[5]，但甜茶提取液對(duì)小腸收縮活動(dòng)的影響國(guó)內(nèi)還未見報(bào)道。因此，本實(shí)驗(yàn)研究了甜茶提取液對(duì)離體小腸收縮活動(dòng)的影響，并初步探討其機(jī)制，為甜茶的進(jìn)一步開發(fā)提供參考依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 藥品 市售甜茶葉(1.5g/包，廣西桂林市平樂縣大發(fā)永康甜茶廠，批號(hào)：20080801)，1∶10000的乙酰膽堿液(Ach，上海國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20061114)，臺(tái)氏液(所用試劑均為分析純臨用時(shí)現(xiàn)配[6])。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 家兔4只，體重為2～3kg，雌雄不限，由右江民族醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.1.3 主要儀器 BL-420生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)(成都泰盟科技有限公司)，CW-2平滑肌槽恒溫儀(張家港市生物醫(yī)學(xué)儀器廠)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 廣西甜茶葉提取液的制備 取廣西甜茶葉21g，加500ml水，浸泡30min，武火煮沸后轉(zhuǎn)文火煎煮20min，過濾，將濾出的茶葉再加250ml水文火煎煮20min，過濾，合并兩次濾液，定容為1g/ml，實(shí)驗(yàn)時(shí)稀釋為0.5g/ml。

1.2.2 兔離體小腸標(biāo)本的制備 實(shí)驗(yàn)兔禁食24h，自由飲水，實(shí)驗(yàn)前1h喂食，實(shí)驗(yàn)時(shí)，鈍擊后枕致死，剖開腹腔，分離十二指腸、空腸、回腸，并各取一段10cm腸段，于室溫臺(tái)氏液中洗去內(nèi)容物，將腸段剪成2cm的小段，分別置于培養(yǎng)皿中，通入空氣，平衡30min。

1.2.3 甜茶提取液對(duì)離體十二指腸收縮活動(dòng)的影響 取一段十二指腸腸管置于盛有38℃臺(tái)氏液的平滑肌槽內(nèi)，一端固定在玻璃通氣鉤上，另一端固定在張力換能器上，與BL-420生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)相連，維持浴槽內(nèi)臺(tái)氏液溫度(38±0.5)℃，并通入空氣(1個(gè)氣泡/s)，調(diào)節(jié)腸肌收縮前負(fù)荷為2g，平衡10min，待基線穩(wěn)定后，記錄正常小腸平滑肌收縮曲線。然后依次滴加0.5g/mL的甜茶提取液0.2ml、0.4ml、0.6ml，每次加藥前，均要用38℃的新鮮的臺(tái)氏液沖洗小腸肌3次，待小腸收縮恢復(fù)到用藥前水平，再加入下組藥液，觀察每次用藥前后的小腸平滑肌收縮曲線的變化。在滴加0.6ml甜茶提取液，觀察有效果后，滴加0.1‰乙酰膽堿0.1ml(終濃度為0.2mg/L)，觀察其曲線的變化，記錄各組用藥前后30s小腸收縮頻率和幅度的變化。

1.2.4 甜茶提取液對(duì)離體空腸、回腸收縮活動(dòng)的影響 除將十二指腸分別換成空腸和回腸外，其實(shí)驗(yàn)方法同1.2.3項(xiàng)下方法，觀察每次用藥前后小腸平滑肌收縮曲線的變化和滴加乙酰膽堿后其曲線的變化。并記錄各組用藥前后30s小腸收縮頻率和幅度的變化。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，采用t檢驗(yàn)進(jìn)行分析比較。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 甜茶提取液對(duì)離體十二指腸收縮活動(dòng)的影響 三個(gè)劑量組(低劑量組：0.2ml、中劑量組：0.4ml、高劑量組：0.6ml)的甜茶提取液均能使離體十二指腸的收縮幅度和收縮頻率降低，說明甜茶提取液對(duì)離體十二指腸的收縮活動(dòng)有抑制作用。在收縮幅度方面，用藥前后比較，三個(gè)劑量組均有高度顯著性差異(P＜0.01)。在收縮頻率方面，用藥前后比較，低劑量組無變化(P＞0.05)，中、高劑量組有顯著性差異(P＜0.05)，其中高劑量組抑制程度最大。滴加乙酰膽堿后，十二指腸的收縮活動(dòng)增強(qiáng)。見表1，圖1。

2.2 甜茶提取液對(duì)離體空腸收縮活動(dòng)的影響 三個(gè)劑量組的甜茶提取液均能使離體空腸的收縮幅度和收縮頻率降低，說明甜茶提取液對(duì)離體空腸的收縮活動(dòng)有抑制作用。在收縮幅度方面，用藥前后比較，三個(gè)劑量組均有高度顯著性差異(P＜0.01)。在收縮頻率方面，用藥前后比較，低劑量組無變化P＞0.05),中高劑量組有顯著性差異(P＜0.05)。其中高劑量組抑制程度最大，見表2。滴加乙酰膽堿后，空腸的收縮活動(dòng)增強(qiáng)。

2.3 甜茶提取液對(duì)離體回腸收縮活動(dòng)的影響 三個(gè)劑量組的甜茶提取液均能使離體回腸的收縮幅度和收縮頻率降低，說明甜茶提取液對(duì)離體回腸的收縮活動(dòng)有抑制作用。在收縮幅度方面，三個(gè)劑量組均有高度顯著性差異(P＜0.01)，在收縮頻率方面，只有高劑量組的P值小于0.01，其他兩組無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，如表3。滴加乙酰膽堿后，回腸的收縮活動(dòng)增強(qiáng)。

3 討論

表1 十二指腸不同劑量組實(shí)驗(yàn)前后收縮幅度、收縮頻率的比較(±s)

表1 十二指腸不同劑量組實(shí)驗(yàn)前后收縮幅度、收縮頻率的比較(±s)

注：與給藥前后比較，at=6.163，bt=7.167，ct=6.212，P均＜0.01；st=1.844，P＞0.05；et=2.646，ft=7.426，P均＜0.05。

組別 劑量(ml) n 收縮幅度(g) 收縮頻率(次/分)給藥前 給藥后 給藥前 給藥后低劑量 0.2 10 2.95±0.65 2.42±0.52a 15.90±1.45 13.50±4.81d中劑量 0.4 10 2.90±0.58 2.18±0.45b 16.80±1.32 10.50±7.47e高劑量 0.6 10 2.82±0.54 2.11±0.36c 17.40±1.51 3.00±6.11f

表2 空腸不同劑量組實(shí)驗(yàn)前后收縮幅度、收縮頻率的比較(±s)

表2 空腸不同劑量組實(shí)驗(yàn)前后收縮幅度、收縮頻率的比較(±s)

注：與給藥前后比較，at=5.173,bt=7.848,ct=7.520，P均＜0.01；dt=1.801，P＞均0.05；et=2.660,ft=3.078，P均＜0.05。

組別 劑量(ml) n 收縮幅度(g) 收縮頻率(次/分)給藥前 給藥后 給藥前 給藥后低劑量 0.2 10 3.18±0.42 2.61±0.21a 15.70±1.25 12.9±4.91d中劑量 0.4 10 3.09±0.39 2.26±0.21s 16.20±1.03 1.10±6.17e高劑量 0.6 10 2.82±0.30 2.07±0.30c 15.10±1.45 9.30±5.85s

表3 回腸不同劑量組實(shí)驗(yàn)前后收縮幅度、收縮頻率的比較(±s)

表3 回腸不同劑量組實(shí)驗(yàn)前后收縮幅度、收縮頻率的比較(±s)

注：與給藥前后比較，at=11.661,bt=8.939,ct=8.447，P均＜0.01；dt=0.721,et=1.808，P均＞0.05；ft=3.383，P＜0.01。

組別 劑量(ml) n 收縮幅度(g) 收縮頻率(次/分)給藥前 給藥后 給藥前 給藥后低劑量 0.2 10 2.92±0.21 2.57±0.25a 15.50±3.10 14.90±2.28d中劑量 0.4 10 2.72±0.29 2.27±0.27b 16.20±3.61 12.10±5.49e高劑量 0.6 10 2.65±0.30 2.09±0.26c 16.30±4.85 9.50±6.80f

廣西甜茶，在我國(guó)80年代初藥物調(diào)查時(shí)才開始發(fā)現(xiàn)。甜茶葉在廣西民間應(yīng)用已久，民間入藥用于補(bǔ)腎降壓，被譽(yù)為神茶，與羅漢果、合浦珍珠、廣西香料等齊名為廣西十大名品。經(jīng)研究甜茶有降血壓、降血糖的作用，并有促進(jìn)新陳代謝、治療胃酸過多等功效，可以作為糖精和蔗糖的替代品用于食品、醫(yī)藥等行業(yè)[7-8]。長(zhǎng)期以來除當(dāng)茶葉飲用之外，還可藥用。其葉具有清熱潤(rùn)肺、祛痰止咳[9]等功效。

圖1 乙酰膽堿對(duì)甜茶提取液腸抑制作用的影響

本實(shí)驗(yàn)采用離體小腸平滑肌收縮幅度和收縮頻率作為觀察指標(biāo)，能較為敏感地反映小腸收縮幅度和收縮頻率的變化。此次實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，給藥后不同部位的離體小腸緊張性降低，收縮幅度明顯減小，而對(duì)收縮頻率的影響，低劑量組無變化，中、高劑量組能使收縮頻率減少。此實(shí)驗(yàn)表明廣西甜茶提取液對(duì)不同部位的離體小腸運(yùn)動(dòng)均有明顯的抑制作用；使腸管平滑肌收縮幅度減少，肌張力降低，不同部位腸段的收縮頻率與藥物濃度之間存在量效關(guān)系，但廣西甜茶提取液對(duì)小腸不同部位的運(yùn)動(dòng)影響不存在差異。

乙酰膽堿是膽堿能神經(jīng)末梢釋放的一種興奮性腸管神經(jīng)遞質(zhì)，具有重要的胃腸道運(yùn)動(dòng)調(diào)節(jié)功能。乙酰膽堿可激動(dòng)胃腸平滑肌上的M受體，通過cAMP作為第二信使的細(xì)胞膜信號(hào)傳導(dǎo)，導(dǎo)致鈣離子內(nèi)流，興奮平滑肌并產(chǎn)生強(qiáng)烈的收縮運(yùn)動(dòng)[10]。實(shí)驗(yàn)表明廣西甜茶提取液與乙酰膽堿互為拮抗作用，表現(xiàn)為甜茶提取液所致的抑制收縮幅度作用被乙酰膽堿緩解，可能與競(jìng)爭(zhēng)M受體有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)為研究甜茶治療消化道疾病提供了依據(jù)。

[1]黃漢強(qiáng).甜茶應(yīng)用研究[J].時(shí)珍國(guó)藥研究,1996,7(2):117-118.

[2]陳奇.中藥藥理實(shí)驗(yàn)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1994:70.

[3]陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1993:669.

[4]廖曼云,覃國(guó)忠.甜茶的毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)研究[J].廣西植物,1985,5(1):43.

[5]彭亞貞.具有消炎、抗過敏及抑制酸分解作用的甜茶提取物[J].國(guó)外醫(yī)藥,植物藥分冊(cè),1995,10(5):236.

[6]陳世民,符健,趙善民,等.實(shí)驗(yàn)生理科學(xué)[M].上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,2003:166-167.

[7]鄧紹林.廣西甜茶葉片的營(yíng)養(yǎng)成分及開發(fā)利用價(jià)值研究[J].中國(guó)林副特產(chǎn),2000,(3):18-19.

[8]李莉,何克新.甜茶提取物的醫(yī)學(xué)研究現(xiàn)狀[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生,2006,22(2):199-201.

[9]鐘正賢,周桂芬,陳學(xué)芬,等.廣西甜茶提取物藥理研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2000,11(10):807-808.

[10]王蓓蓓,楚更五,鄭梅.痛瀉藥方與乙酰膽堿對(duì)家兔離體小腸平滑肌作用的研究[J].浙江中醫(yī)雜志,2007,42(4):235-237.