陳江 崔彬

原發(fā)性肝癌(Primary liver cancer, PLC)居我國癌癥發(fā)病率的第二位，其中90%以上為肝細(xì)胞癌(HCC)，HBV感染與HCC的發(fā)生密切相關(guān)，而凋亡抑制基因survivin在HCC的發(fā)生發(fā)展中也起重要作用。因此就HBV感染后HCC的生物學(xué)行為以及與survivin蛋白表達(dá)的關(guān)系進(jìn)行研究，探討HBV感染后HCC的生物學(xué)行為。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 取2000年2月～2006年5月肝穿并經(jīng)病理證實(shí)臨床和病理資料完整的HCC標(biāo)本61例?；颊呔唇?jīng)過任何抗腫瘤治療，男性52例，女性9例，年齡28～76歲，中位年齡45.6歲。病理分級按Edmondson分級法分級，I級3例，II級16例，III級40例，IV級2例。按全國肝癌病理協(xié)作組提出的HCC的大體分類方法，結(jié)節(jié)型14例，巨塊型46例，彌漫型1例。47例AFP增高，29例GGT和ALT增高，B超及CT檢查證實(shí)18例伴有門靜脈癌栓。

1.2 方法與試劑 人Survivin(FL-142)單抗及S-P試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，免疫組化采用S-P方法，操作步驟如下:石蠟切片脫蠟至水;3%H2O2室溫孵育5～10min;微波抗原修復(fù);正常山羊血清封閉，室溫15min，滴加Survivin-抗原工作液，冰箱內(nèi)4ΟC過夜; PBS沖洗，滴加第二代生物素，標(biāo)記二抗工作液，室溫20min; PBS沖洗，滴加第二代辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液，室溫20min;PBS沖洗，DAB顯色，自來水沖洗，蘇木素復(fù)染，封片。已知的乳腺癌切片為陽對照，PBS代替一抗作為空白對照。

1.3 結(jié)果判斷 采用雙盲法，觀察切片至少5個(gè)上個(gè)具有代表性高倍視野，不少于1000個(gè)細(xì)胞，對免疫結(jié)果進(jìn)行評估。Survivin陽性表達(dá)定位于細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色。根據(jù)常規(guī)Survivin陽性細(xì)胞在同類細(xì)胞中所占比例分四個(gè)等級。陽性細(xì)胞＜10%為“-”，10%～25%“+”，26%～50%為“++”，＞51%為“+++”。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 根據(jù)實(shí)驗(yàn)資料的性質(zhì)，對所得資料進(jìn)行x2檢驗(yàn)，P＜0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HBV感染及survivin表達(dá)與HCC生物學(xué)行為的關(guān)系HBV感染與HCC病例的年齡、腫瘤直經(jīng)以及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的發(fā)生無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，與HCC的Edmondson分級、門靜脈癌栓的形成、AFP值的升高肝內(nèi)轉(zhuǎn)移的發(fā)生以及GGT的升高有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。survivin的表達(dá)與AFP增高及腫瘤直徑大小及酶學(xué)改變正相關(guān)(P＜0.05)；與Edmondson分級及肝內(nèi)轉(zhuǎn)移的有無門脈癌栓形成無關(guān)(見表1)。

2.2 HBV感染與survivin蛋白表達(dá)的關(guān)系 survivin蛋白在HCC組織的陽性表達(dá)主要在細(xì)胞質(zhì)中,呈棕黃色顆粒。39例HBV感染HCCsurvivin蛋白的陽性表達(dá)率為68.23%(27/39)，強(qiáng)陽性表率(陽性細(xì)胞＞51%)為40%(12/39);22例非HBV感染HCC組織survivin蛋白的表達(dá)率為31.81%(7／22)，強(qiáng)陽性表率為(13.6%)3/22;兩者分別有顯著性差異(x2＝21.97,P＜0.05)。

表1 HBV感染與HCC生物學(xué)行為關(guān)系

3 討論

HBV持續(xù)感染引起的炎癥、壞死及再生可能導(dǎo)致細(xì)胞突變的概率增加，HBV感染也可以使一些抑癌基因失活，導(dǎo)致肝細(xì)胞的細(xì)胞周期失控，使其向“永生化”發(fā)展[1]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，HBV感染與HCC的Edmondson分級、門靜脈癌栓的形成、AFP增高、肝內(nèi)轉(zhuǎn)移、及酶學(xué)改變顯著相關(guān)，提示HBV感染是肝癌的主要致癌因素并影響其生物學(xué)行為。我國肝癌患者中,HBV流行率明顯高于對照人群,在HBV感染誘發(fā)原發(fā)性肝癌的過程中,有多種機(jī)制共同發(fā)揮作用。病毒DNA整合入肝細(xì)胞基因組后可激活一系列癌基因，并已發(fā)現(xiàn)HBV的X蛋白起著重要的作用[1]。Survivin是新發(fā)現(xiàn)的凋亡抑制蛋白家族成員之一，研究表明survivin在肝細(xì)胞癌中的陽性表達(dá)率為31%～70%[2]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在原發(fā)性肝細(xì)胞癌中HBV感染(HBsAg陽性)與survivin陽性表達(dá)顯著正相關(guān)(69.23%),而HBsAg陰性者survivin陽性表達(dá)率為31.81%。提示在肝細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展過程中，HBV感染可以誘發(fā)Survivin過表達(dá)。survivin與乙型肝炎病毒X蛋白結(jié)合蛋白(HBXIP)結(jié)合，形成survivin-HBXIP復(fù)合物，該復(fù)合物與半胱氨酸酶-9(caspase-9)前體結(jié)合，阻止其與凋亡蛋白激活因子1(APAF1)發(fā)生募集反應(yīng)，從而抑制由線粒體/細(xì)胞色素C通路引發(fā)的細(xì)胞凋亡，使基因受損的肝細(xì)胞死亡障礙，引發(fā)癌變[3]。HBV感染后，乙型肝炎病毒X蛋白結(jié)合蛋白(HBXIP)與survivin共同作用在HCC的發(fā)生發(fā)展中有著重要的作用。

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